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實(shí)驗(yàn)時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。

樣品收集、處理及保存 . 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以000g離心5分鐘，收集上清。 2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到04-06/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商溝通，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。