等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣：
雙重核酸試劑盒（熒光PCR法） .  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。
2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 20 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 20 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 00ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3.  0× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 : 0 倍稀釋（ 示例： ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。
4.  洗滌液：用重蒸水 :20 稀釋（示例：ml 濃縮洗滌液加入 9ml 的重蒸水）
檢測程序：
.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 00ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 20 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液0 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液00ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液00ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)5 分鐘。
8.  每孔加入00ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
 非特異產(chǎn)物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調(diào)整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當(dāng)減少循環(huán)數(shù)
4.適當(dāng)提高退火溫度，縮短退火或延伸時間