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傳代細胞內(nèi)皮細胞-細胞凍存和復(fù)蘇實驗原理與注意事項

更新時間:2015-10-28 點擊量:1504

    按照常規(guī)的組織學分類方法,脊椎動物和人體細胞類型約有200余種。這些細胞在人體中呈現(xiàn)有序的空間分布。細胞是人體的結(jié)構(gòu)和功能單位。共約有40萬--60萬億個,細胞的平均直徑在0--20微米之間。除成熟的紅血球外,所有細胞都有一個細胞核,是調(diào)節(jié)細胞作用的中心。zui大的是成熟的卵細胞,直徑在0.毫米以上;zui小的是血小板,直徑只有約2微米。而75000個精子細胞才抵得上一個卵細胞的重量。腸粘膜細胞的壽命為3天,肝細胞壽命為500天,而腦與骨髓里的神經(jīng)細胞的壽命有幾十年,同人體壽命幾乎相等。血液中的白細胞有的只能活幾小時。

傳代細胞內(nèi)皮細胞-細胞凍存和復(fù)蘇實驗原理:

    細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高 細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶 形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免 由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。

傳代細胞內(nèi)皮細胞-細胞凍存和復(fù)蘇實驗注意事項:

. 從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生細胞。在凍存 前一天換一次培養(yǎng)液。

2. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷。

3. 凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

傳代細胞內(nèi)皮細胞-凍存和復(fù)蘇的原則:

    慢凍快融 當細胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下 變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶。 如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水 ,細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目 的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。

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