有兩種方法用來檢測抗原特異性IgE抗體：（）IgE抗體檢測，前面稱為放射免疫吸附試驗（2）淋巴細胞組胺釋放試驗。描述淋巴細胞組胺釋放試驗是在50多年以前，隨后它被改進和自動化。22-25先用葡聚糖沉淀法分離外周血淋巴細胞，洗滌，用含鈣和鎂離子的緩沖液懸浮。往洗滌過的固定量的淋巴細胞中，加入不同濃度的變應(yīng)原提取物，混合物在37℃孵育一小時。4℃冷卻試管以終止反應(yīng)，通過離心分離細胞。變應(yīng)原與結(jié)合在細胞上的IgE抗體發(fā)生反應(yīng)后，嗜堿細胞釋放組胺至上清液，先用丁烷再用酸提取組胺?？捎脽晒夥止夤舛扔嫽騌IA方法檢測提取物中的組胺濃度。26.27手工操作的熒光分光光度計法，可檢測大約ng的組胺。RIA法更敏感。用細胞釋放的組胺占組胺總濃度的百分比來表示結(jié)果，將未接觸過變應(yīng)原提取物的淋巴細胞溶于高氯酸，然后在該細胞溶解產(chǎn)物中檢測組胺的總濃度。

淋巴細胞組胺釋放試驗詳細說明了結(jié)合在細胞上的IgE抗體的特異性，也表明了釋放介導(dǎo)因子的機制在功能上的完整。大約5%的個體，他們的淋巴細胞在體內(nèi)不釋放組胺。28盡管已發(fā)展了自動化系統(tǒng)來檢測組胺，但組胺釋放試驗的臨床應(yīng)用仍然有限，因為它要求使用新鮮血液，而且，僅單獨使用血液的一部份就能檢測出的變應(yīng)原也很有限。29還有，用這些方法測定組胺時，存在相當(dāng)大的室內(nèi)實驗室差異。

IgE抗體檢測是一個雙位點IMA。3該方法的*階段：IgE抗體待測的血清標本與固相結(jié)合的變應(yīng)原免疫吸附劑反應(yīng)。第二階段：2-4小時后，沖掉沒有抗體的血清部份，變應(yīng)原與放射性標記或酶標，及經(jīng)親和力層析法純化的抗體或單克隆抗-IgE抗體一起孵育。第二階段的抗-IgE抗體與變應(yīng)原免疫吸附劑的結(jié)合，可以檢測在*階段被結(jié)合的抗體。

IgE抗體檢測并沒有測出IgE抗體的實際濃度。許多過敏性個體的血清，含的抗體濃度都超過變應(yīng)原免疫吸附劑的結(jié)合能力，因而*階段孵育的上清液中，含有過剩的IgE抗體。32而且，由于大多數(shù)變應(yīng)原都是復(fù)雜的蛋白質(zhì)或糖化蛋白，所以，各血清包含的是能以不同的親和力與變應(yīng)原反應(yīng)的抗體混合物。而且，在一限定的范圍，第二階段抗體的結(jié)合與血清里的IgE抗體濃度成比例。這層關(guān)系已在用校正的標準曲線定量測定IgE抗體的研究應(yīng)用中被用到。33.34然而，由于常規(guī)的IgE抗體檢測，IgE抗體通常都過量，第二階段抗體的結(jié)合不僅反映了待測抗體的量，還反映了它的親和力，因此，結(jié)果是半定量的。

正如前面Wide等人3描述的那樣，IgE抗體檢測使用了與交聯(lián)匍聚糖珠粒共價結(jié)合的變應(yīng)原。隨后人們又使用了各種別的固相材料，34.35包括纖維素載體，微晶纖維素顆粒，瓊脂糖珠子，濾紙，多聚乙烯小杯或微量滴定孔。這些固相材料大多都是帶有游離氫氧根的多醣類，該氫氧根能與溴化氰反應(yīng)形成穩(wěn)定的咪多卡中間物。36后者與蛋白質(zhì)變應(yīng)原的氨基部份反應(yīng)形成共價鍵。與多聚乙烯孔或小杯的結(jié)合是非共價吸附。臨床實驗用時，變應(yīng)原免疫吸附應(yīng)該含有原始變應(yīng)原提取物的所有免疫源性成份，并且與復(fù)雜的變應(yīng)原具相同比例。雖然監(jiān)測蛋白質(zhì)與固相發(fā)生化學(xué)結(jié)合，相對來說比較容易，但在不同的變應(yīng)原系統(tǒng)，很少有這樣一些數(shù)據(jù)提供，即能夠表明所有的相關(guān)變應(yīng)原都被結(jié)合上了。Alternaria變應(yīng)原已被具體地研究過，吸附研究表明，所有相關(guān)的免疫源性成份都被結(jié)合到了固相免疫吸附劑上。用固相免疫吸附劑吸附0個Alternaria過敏病人的血清，該血清池的皮膚致敏活性將喪失。37確保所有相關(guān)變應(yīng)原都與固相免疫吸附劑結(jié)合上的另一方法就是，用含變應(yīng)原的溶液與化學(xué)活化的微粒子免疫吸附劑結(jié)合。38沖洗，懸浮吸附試劑，從對還在疑問當(dāng)中的變應(yīng)原過敏的幾個個體中得到血清，然后用這些不同量的血清來檢測，從而得到一系列劑量反應(yīng)曲線。當(dāng)所有的變應(yīng)原都固相免疫吸附劑結(jié)合后，劑量反應(yīng)曲線變平。這點之前制備的各免疫吸附劑搭配后產(chǎn)生zui終的固相免疫吸附劑。

如前所述，商業(yè)上已提供了好幾種類型的變應(yīng)原免疫吸附劑。商業(yè)提供的zui普遍的是使用纖維載體或免疫吸附盤，但小杯型的免疫吸附劑如微量滴定孔，也有提供。無論使用哪一型試劑，在技術(shù)上都很方便。因為在測定過程中，不需要離心。試劑一旦配置好，都很穩(wěn)定。

IgE抗體檢測的分析靈敏度部份是由第二階段使用的標記的抗-IgE抗體決定。商業(yè)上放射性標記、親和力層析純化的抗-IgE抗體作為蛋白質(zhì)的檢測，效果很好，可以定量檢測ng的IgE抗體。39為了循環(huán)使用放射性標記的抗-IgE抗體，商業(yè)商已發(fā)展了使用酶連抗體的免疫方法。這些方法的分析特征跟舊的RIA方法相似。放射性標記的單克隆抗體在商業(yè)上也有提供。

幾乎所有的常見變應(yīng)原（包括動物上皮細胞，食物，霉菌，塵，昆蟲毒液，一些藥物，以及牧草、野草和樹木的花粉）都被提供用于IgE抗體的檢測。大多數(shù)藥物都低分子量的復(fù)合物，沒有游離的氨基部份，不會與溴化氰活化的固相起反應(yīng)。然而，有些低分子量的藥物，如胰島素，卻能與之結(jié)合并制成令人滿意的免疫吸附劑。至于，Penicilloyl可以與Polylysine或蛋白質(zhì)載體結(jié)合，后者又可與活化的固相結(jié)合，以用于IgE抗體的檢測。40還沒提供有類似的試劑，用于檢測這類IgE抗體的檢測，即抗所謂的微量抗原性決定物，該物質(zhì)可能與一些急性過敏反應(yīng)有關(guān)。

如更前面所談到的，IgE抗體檢測不是定量的免疫測定，結(jié)果的描述也很復(fù)雜，因為有好幾種公式可以用來給結(jié)果記分和報告結(jié)果。大多數(shù)商業(yè)上提供的、以結(jié)果的得分情況為根據(jù)的方法，都是以與病人劑量反應(yīng)曲線數(shù)據(jù)做對比為根據(jù)。兩種方法zui常用：把一系列陽性質(zhì)控物的稀釋液與變應(yīng)原免疫吸附劑一起孵育，得到參考曲線；或用結(jié)合抗-IgE抗體的免疫吸附劑去捕獲標準液中的IgE，該標準液中一已知量的IgE蛋白質(zhì)。（如25U/ml）。無論哪一種情況，都要定義一個閾值，用來表示IgE與固相的非特異性結(jié)合（陰性）和gE與免疫吸附劑的變應(yīng)原特異性結(jié)合（陽性）之間的臨界值。定量表示結(jié)果可以用單位/毫升，半定量表示是從0級（陰性）- 6級（強陽性），或用比率來表示：待測血清的結(jié)合跟同一方法檢測到的非過敏個體血清池的結(jié)合相比。理論上，zui后這種方法比較合適，因為不可能假設(shè)每一個抗體-變應(yīng)原系統(tǒng)都產(chǎn)生相同的劑量反應(yīng)曲線。

除了隨機誤差，還有別的原因?qū)е翴gE抗體檢測的結(jié)果有誤。IgE蛋白質(zhì)水平增高的血清和許多變應(yīng)原免疫吸附劑一起檢測的時候，由于非特異性結(jié)合的增加，血清會產(chǎn)生臨界或弱陽性結(jié)果。IgE濃度低于000 U/ml時不會出現(xiàn)這種現(xiàn)象，除非把陰性和陽性的分界點設(shè)在很低的水平。42由于IgG抗體對IgE抗體結(jié)合的抑制，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。43IgG抗體的親和力與IgE抗體相似，而且，在免疫治療中的病人身上，通常以ng/ml的濃度出現(xiàn)。44IgE抗體的檢測，對判定已接受治療的病人身上是否還有臨床過敏性存在作用不大，在未接受過治療的病人身上，很少發(fā)現(xiàn)有高水平的IgG抗體。

由于沒有*可靠的參考方法來定義一個變應(yīng)原的敏感性，所以很難定義IgE抗體的診斷靈敏度和特異性。但很多的臨床研究，都把IgG抗體檢測的結(jié)果與體內(nèi)診斷試驗（皮膚測試，吸入抗原或兩者）和過敏性疾病家族史做對比。從這些研究中可以很清楚地看到：由于接觸抗原與檢測的間隔時間不同、變應(yīng)原種類不同、病人年齡以及受影響的靶器官不同，使得診斷靈敏度有相當(dāng)大的變化。更重要的是，IgG抗體檢測的敏感性與臨床敏感性成正比。不考慮變應(yīng)原或過敏性疾病，對變應(yīng)原顯著過敏的個體，IgG抗體檢測的結(jié)果可能為陽性，而在具輕微過敏性的個體中可能為陰性。

在不同的變應(yīng)原系統(tǒng)中，許多研究都支持這樣一個結(jié)論：對變應(yīng)原具有輕微過敏的個體，皮膚試驗比IgE抗體檢測更敏感。然而，也有許多類似的研究表明，用陽性內(nèi)臟激發(fā)試驗，皮膚測試里很大一部份的弱陽性不能被確認。這種討論有點不切實際：對變應(yīng)原顯著過敏的病人，無論皮試還是IgE抗體實驗，都很可靠，而對輕微程度的臨床過敏，兩者都不是*可靠。

與皮試相比，檢測IgE抗體有一定的優(yōu)勢：它方便；對病人沒有危險；結(jié)果不受藥物治療的影響。除此之外，對某些群體的病人，更應(yīng)使用IgE抗體檢測而不是皮試：如嬰幼兒、皮膚劃紋癥病人或全身性皮膚炎病人。IgE抗體檢測也有不足：血清學(xué)實驗比皮試昂貴而敏感性卻不如它，且不能立即出結(jié)果。
皮試可用多種變應(yīng)原，與此相比，多種IgE抗體的檢測,所需要的花費卻限制了它作為過敏性疾病篩選的用途。近年，人們通過改進IgE抗體的測定方法，發(fā)展了多變應(yīng)原IgE抗體檢測，它可能更有效。多變應(yīng)原IgE抗體檢測是在同一試管中，加入多種變應(yīng)原的免疫吸附劑，或使用已結(jié)合多種變應(yīng)原的吸附劑。多變應(yīng)原方法分析的敏感性可與單變應(yīng)原方法相比。對鑒別吸入性變應(yīng)原導(dǎo)致呼吸道變態(tài)反應(yīng)的孩子，多變應(yīng)原方法的診斷敏感性比IgE抗體檢測更高，46 當(dāng)然，要證明該實驗篩選過敏性疾病的臨床用途，還需更多的研究。